دكتوراه في الكيمياء التحليلية | متخصص في تقنيات التحليل الكروماتوجرافي وتطبيقاتها، مثل HPLC, GC, LC/MS, GC/MS | صديق مخلص للأجهزة الكروماتوجرافية منذ العام 2002
⚖️
⚖️
⚖️
مطياف الكتلة
Mass Spectrometer, MS
هو مكشاف المستقبل لأجهزة HPLC وغيرها من الأجهزة الكروماتوجرافية!
ولولا سعره المرتفع حالياً لوجدناه مع كل جهاز HPLC.
إضافة لعمله كمكشاف يعطينا الكروماتوجرام وأزمنة الاستبقاء (Retention times) ومساحات القمم؛
فإنه يتميز بقدرته على
💧
💧
💧
الطور المتحرك Mobile Phase هو نصف #الكروماتوجرافيا !
في HPLC يكون سائلاً،
إما الماء أو محاليل مائية أو مذيبات عضوية، أو خليط منها
لكن بمواصفات خاصة بـ HPLC !!
باختصار:
يجب استخدام درجة نقاوة HPLC لحياة أطول للجهاز والأعمدة !
#الكيمياء #معلومات_كيميائية
📠
هنا أجزاء جهاز HPLC مع مكشاف الأشعة فوق البنفسجية والمرئية UV/Vis Detector.
لاحظوا أنه مكون من وحدات Modules منفصلة عن بعضها ومرتبطة فقط بالأنابيب والتوصيلات الكهربائية.
لكن هل فعلاً نحتاج كل هذه الوحدات في أي HPLC ؟؟؟
هل يمكن الاستغناء عن بعضها ؟؟ ماذا؟
#الكروماتوجرافيا
🧲
〰️
🧲
مطياف الرنين النووي المغناطيسي
Nuclear Magnetic Resonance - NMR
الجهاز الذهبي الأهم لأي كيميائي يحتاج للتعرف على تركيب (Structure) المركبات العضوية وتحديد هويتها !
ولكنه يتطلب مركبات نقية من أجل الحصول على الأطياف اللازمة !
وفي حالة وجود المركب في مخلوط مثل
💡
HPLC
التقنية الكروماتوجرافية الأوسع استخداماً والأكثر تطبيقات !
الاختصار HPLC الذي يعرفه كل من سمع بالكروماتوجرافيا هو لـ:
كروماتوجرافيا السائل عالية الضغط
High-Pressure Liquid Chromatography
أو
كروماتوجرافيا السائل عالية الأداء
High-Performance Liquid Chromatography
💻
هنا تسجيل محاضرة
" التقنيات الكروماتوجرافية: لماذا ؟ "
المقامة مساء يوم الاثنين 4 مارس 2024م
وفي الرابط أدناه ملف شرائح العرض
أسأل الله أن ينفع بها،
وأشكر لكم جميعاً اهتمامكم.
التقنيات الكروماتوجرافية: لماذا؟ عبر
💧
اختيار الطور المتحرك mobile phase المناسب يعتبر من أهم العوامل التي تساعدنا على تحقيق فصل جيد لمركباتنا في HPLC.
وهو مرتبط ارتباطاً وثيقاً بطبيعة المركبات المستهدفة بالفصل، والعمود المستخدم، وكذلك المكشاف Detector المستخدم.
فيجب اختيار تركيب الطور المتحرك وخواصه بعناية،
💡
تقنية HPLC واسعة الاستخدام والتطبيقات، حيث تستخدم لفصل المركبات والأيونات المشحونة وغير المشحونة، الصغيرة والكبيرة، المتطايرة وغير المتطايرة!
والسبب هو توفر العديد من آليات الفصل Mechanisms of separation!
Photo: Skoog, D. et al. Fundamentals of analytical chemistry.9th Ed.
💡
معظم العاملين على أجهزة HPLC الحديثة ربما لم يواجهوا المشكلات الناتجة من وجود الغازات الذائبة في الطور المتحرك، وذلك للكفاءة الجيدة لأجهزة طرد الغازات (Degasser) المتوفرة مع معظم الأجهزة اليوم !
ولكن الغازات الذائبة في مذيبات الطور المتحرك تظل مصدراً محتملاً للمشكلات في HPLC
🟥
🟥
🟥
مطياف الأشعة تحت الحمراء
Infrared Spectrophotometer (IR; or FTIR)
من التقنيات الطيفية الهامة جداً في تشخيص والتعرف على المركبات - خاصة المركبات العضوية، حيث أن لكل مركب نقي طيف IR خاص ومميز يساعد في التعرف عليه.
وعند توصيل FTIR بجهاز HPLC نستطيع الحصول على أطياف IR
- - -
- -
-
مكشافات HPLC الموَصّلة
Hyphenated HPLC detectors
هي المطيافيات المتقدمة مثل NMR ، FTIR ، MS
والتي تعمل في الأصل كأجهزة مستقلة، ثم تم توصيلها بأجهزة الفصل ومنها HPLC.
تتربع على قمة مكشافات HPLC من حيث الأداء وكمية البيانات التي توفرها !
ولكنها في القمة
💊🩸
🌻🧪
💧🏭
تطبيقات HPLC يصعب حصرها هذه الأيام !
يكفي أن نعلم أن هناك كتب 📕 متخصصة في التطبيقات المختلفة لـ HPLC.
في الصورة بعض هذه التطبيقات !
#الكروماتوجرافيا #الكيمياء #معلومات_كيميائية
Photo Credit:
🧑💻
🧑💻
دورة تدريبية مكثفة مع شهادة اجتياز !
عن " التحقق من صحة الطرق التحليلية على LC-MS "
LC-MS Method Validation
مقدمة مجاناً !
من نخبة من المتخصصين في جامعة
University of Tartu
على شكل مقرر أونلاين.
خلال الفترة 21.11.2023 - 02.02.2024
لمزيد من التفاصيل والتسجيل :
📚
كيف أجد طريقة HPLC المناسبة لفصل وتحليل عيناتي في المنشورات العلمية؟
أولاً: يجب أن تكون أهدافك واضحة قبل بدء البحث.
ولنفرض أن هدفنا هو قياس تركيز الكافيين في المشروبات الغازية.
ثانياً: يجب حصر الإمكانات المتوفرة لدينا، وخاصة جهاز HPLC والمكشافات المتوفرة.
ولنفرض أن لدينا
💧 💧
💧
هنا ملخص لبعض الاستخدامات المعتادة لكل نوع من أنواع المياه المنقاة في المختبرات.
لاحظوا أن الماء المناسب للأجهزة الكروماتوجرافية هو النوع الأول فائق النقاوة Type I
وهذا ما توصي به شركات تصنيع الـ HPLC!
وسأوضح في هذه السلسلة أهمية استخدامه.
Photo Credit:
@Labconco
❓
❓
❓
⁉️
ما هي طريقة HPLC الأفضل لفصل عينتي ؟؟؟
سؤال مهم جداً، ومختصر، وقصير،، وقد يبدو بسيطاً !
ولكن الإجابة عليه للأسف لن تكون بهذه البساطة أو الاختصار !!
في هذه السلسلة سأحاول إعطاء فكرة عن إجابته؛ وكيف نختار طريقة HPLC والعمود الأنسب لفصل عيناتنا.
.
🖥️
عندما بدأت العمل على جهاز HPLC قبل 20 عام؛ لم يكن للجهاز الذي لدينا وحدة تحكم مركزية أو كمبيوتر!
بل كنت أشغّل كل وحدة وأضبط ظروفها لوحدها ثم أنتقل للوحدة التالية وهكذا !
كنت بداية أشغل جميع أزرار الكهرباء للجهاز ثم أنتظر حتى تكمل دورة الاختبار الذاتي وتستقر، وبعدها أضبط
💡
جهاز الفلترة هذا لا غنى عنه لأي مختبر فيه جهاز HPLC.
نستخدمه لفلترة الطور المتحرك قبل صبه في زجاجاته.
وتستخدم فيه فلاتر غشائية (Membrane Filters) بنفاذية أجزاء من الميكرومتر.
#الكروماتوجرافيا #الكيمياء #معلومات_كيميائية
💧
الماء المستخدم في تحضير الطور المتحرك Mobile Phase لجهاز الـ HPLC يجب أن يكون عالي النقاوة (Type I) ومفلتر بفلتر 0.2 ميكرون.
نحصل عليه إما معبأ من الشركات الموثوقة، أو من خلال جهاز تنقية موثوق أيضاً !
ويجب أن يحتوي الجهاز عند مخرج الماء على فلتر 0.2 ميكرون أو يجب فلترته.
🖥️
ندوة مجانية مباشرة من منصة التدريب الرائدة CHROMacademy عن ما يحتاج مشغل جهاز LC-MS لمعرفته.
ستغطي موضوعات هامة عن هذا الجهاز الهام مثل
- مبادئ عمل الجهاز
- كيفية اختيار الطور المتحرك المناسب
- كيفية ضبط اعدادات جهاز مطياف الكتلة
- اكتشاف المشكلات وحلها
الموعد: الخميس 18
⚗️
في بعض الأحيان قد نضطر لاستخدام عمود HPLC أو مكشاف Detector رغم أنه غير مناسب لعيناتنا والمركبات التي فيها !
وذلك إما لعدم توفر البديل أو لأن الطريقة المعتمدة أو المرجعية أو تعليمات المختبر تفرض ذلك؛
عندها سنلجأ لـــ الاشتقاق Derivatization لحل هذه المشكلة!
🩶
في سعينا لاختيار طريقة مناسبة لتحليل عيناتنا باستخدام جهاز HPLC، وبعدما نتحقق من توفر المكشاف المناسب لدينا، فبعدها نركز بحثنا وسعينا على اختيار العمود Column الأنسب لعيناتنا، وهو قلب الجهاز الكروماتوجرافي !
ومن أهم أسباب انتشار أجهزة HPLC واحتلالها مراكز الصدارة في عالم
👨🔬
تدربت بشكل كافٍ لبدء العمل على جهاز HPLC
فكيف أبدأ الآن ؟
لبدء العمل على جهاز HPLC بجب أن تكون لديك الطريقة التحليلية Method التي ستشغّل الجهاز عليها لتنفيذ التحاليل.
الطريقة التحليلية هي مجموعة الظروف التي ستضبط الجهاز عليها لتحقيق الفصل الكروماتوجرافي والنتائج المطلوبة.
💧
من أنماط الفصل في HPLC التي لاقت انتشاراً واسعاً في السنوات الأخيرة هي نوع:
HILIC
أو
Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography
ويستخدم هذا النوع في فصل المركبات عالية القطبية (الهيدروفيلية) أو التي تحمل مجموعات أيونية (كاتيونية أو أنيونية).
#الكروماتوجرافيا
🎯
لنتذكر:
كروماتوجرافيا العمود التقليدي
وكروماتوجرافيا العمود الومضية Flash، حتى الآلية منها؛
يستخدمان بشكل رئيسي في الفصل التحضيري Preparative
لتنقية المكونات المستهدفة بالفصل من شوائبها الموجودة في مخلوط العينة.
لذلك دائما تستخدم أعمدة كروماتوجرافية كبيرة القطر والطول.
➕
➖
➕
➖
➕
➖
كروماتوجرافيا التبادل الأيوني
Ion-Exchange Chromatography
هي من أهم أنواع الكروماتوجرافيا الناجحة في فصل الأيونات والمركبات المشحونة أو القابلة للتأين، مثل:
- الأيونات غير العضوية (أيونات Na, K, Cl, NO3, ...)
- الجزيئات الحيوية biomolecules ( البروتينات،
🎯
رغم وجود عدد من طرق طرد الغازات الذائبة في مذيبات أجهزة HPLC ،،
تظل أجهزة طرد الغازات المتصلة (In-line Degasser) هي الخيار الأسهل والأكثر راحة والأقل جهداً من طرق طرد الغازات الأخرى، وكفاءتها جيدة لتجنب المشكلات.
لذلك إذا تعطل جهاز طارد الغازات فالأفضل المبادرة بإصلاحه.
❓
لماذا يجب أن يكون بجانب كل جهاز HPLC عمود من نوع C18 ؟
باختصار:
لأن المركبات التي يستطيع فصلها هذا العمود عددها كبير جداً مقارنة بغيره من الأعمدة !
وهو عادة الاختيار الأول عندما نريد تطوير طريقة فصل جديدة لطَيفٍ واسع من المركبات العضوية.
صحيح أنه يستخدم أساساً لفصل
.
تقنية HPLC الذهبية المستخدمة لفصل وتحاليل ودراسة خواص الجزيئات الكبيرة Macromolecules مثل البوليمرات الصناعية أو الجزيئات الحيوية مثل الببتيدات والبروتينات والسكريات العديدة، هي تقنية:
كروماتوجرافيا الاستبعاد
Exclusion Chromatography
أو الاسم الأكثر شيوعاً
💡
أول أجزاء جهاز HPLC الرئيسية التي يجب توفرها في كل جهاز هي:
خزانات الطور المتحرك Mobile Phase Reservoirs
وتسمى أيضاً خزانات المذيب Solvent Reservoirs
وهي عادة زجاجات بحجم 500 أو 1000 mL، بغطاء يحتوي سدادة من التفلون، فيها فتحات لمرور أنابيب من التفلون بنهايتها فلتر.
💉
قبل حقن أية عينة في جهاز HPLC
يجب فلترتها باستخدام الفلتر الغشائي بنفاذية 0.45 ميكرومتر أو أقل؛ لضمان تنقيتها من أية شوائب صلبة؛ والتي قد تتسبب في انسداد أنابيب الجهاز الدقيقة أو مدخل العمود الكروماتوجرافي. إضافة لمشكلات أخرى تسببها.
#الكروماتوجرافيا
➕➖
➖➕
➕➖
النموذج الأشهر لكروماتوجرافيا التبادل الأيوني في HPLC هي ما يعرف اختصارًا بـ
"كروماتوجرافيا الأيون Ion Chromatography"
وهي موجهة بشكل أساسي لتحاليل الأيونات غير العضوية.
ولكن تستخدم أيضاً في تحاليل الكثير من الأيونات والجزيئات العضوية والحيوية!
ولها أجهزتها
📉
📈
📉
المكشاف Detector في أجهزة HPLC ينتهي دوره بالكشف عن ما تم داخل النظام الكروماتوجرافي ويعطينا إشارة كهربائية تساعدنا في رسم الكروماتوجرام Chromatogram !
ولكن من الذي يرسم الكروماتوجرام ويستخلص بياناته ؟
في بدايات تطوير الأجهزة الكروماتوجرافية كانت تعتمد على ما يسمى "
❓
❓
سنبدأ - إن شاء الله - سلسلة من التطبيقات العملية على جهاز كروماتوجرافيا السائل عالية الأداء HPLC ، لتوضيح أهم مبادئ هذه التقنية.
ونبدأ هنا بمشروع للطالبين ماجد وزكريا نفذاه لتطوير طريقة لفصل ثلاثة مركبات هيدروكربونية هي: بنزين – نفثالين – أنثراسين (موضح تركيبها في
❓
📜
أين أجد الطريقة التحليلية Method التي سأشغّل عليها جهاز HPLC لتنفيذ التحاليل ؟
لدينا عدد من المصادر للطرق التحليلية، أهمها:
1- وثائق "إجراءات التشغيل القياسية" أو
Standard Operating Procedures (SOP)
2- "الطرق المرجعية" المعتمدة من المنظمات الدولية أو الجهات الحكومية
🖥️
ندوة مجانية جديدة ومباشرة من منصة التدريب الرائدة CHROMacademy عن:
ما يحتاج مشغل جهاز GC-MS لمعرفته.
ستغطي موضوعات هامة عن هذا الجهاز مثل:
- أساسيات تحضير العينات لهذا الجهاز
- لماذا نستخدم مطياف الكتلة كمكشاف لأجهزة الـ GC
- الاعتبارات الخاصة بأجهزة GC المرتبطة مع مطياف
📝
"مذكرات التطبيقات" أو "المذكرات التقنية"
Application Notes OR Technical Notes
تصدرها شركات تصنيع الأجهزة والتقنيات الكروماتوجرافية حيث تتضمن طرقاً تحليلية طورتها الشركة وصممتها على أحد أجهزتها أو منتجاتها (مثل الأعمدة الكروماتوجرافية).
لذلك نجد فيها تفاصيل جيدة في
☕️
أول ما نسعى لتحقيقه عند تطوير طريقة فصل على HPLC هي أن نحصل على استبقاء retention كافٍ للمركبات المستهدفة بالفصل في العمود. ولا يمكننا الانتقال للخطوات التالية قبل تحقيق ذلك.
هنا مثال عملي على مركب تريقونلين (Trigonelline) في القهوة حيث واجهنا صعوبة في تحقيق استبقاء كافٍ له
🩺
💉
🩸
التطبيقات الطبية في فصل وتحاليل البروتينات تعتبر من أهم التطبيقات البارزة لتقنيات HPLC المعتمدة على أعمدة التبادل الأيوني Ion-Exchange HPLC.
ومن أشهر هذه التطبيقات التي تتنافس الشركات الطبية اليوم في تصنيع أجهزة وأعمدة خاصة لها هي تحاليل الهيموجلوبين وأنواعه
💡
كروماتوجرافيا الامتزاز في HPLC
Adsorption HPLC
هي أقدم آليات الفصل الكروماتوجرافي
وكانت هي الآلية المعتادة أو "الطور العادي Normal Phase"
الطور الثابت فيها جسيمات صلبة قطبية مثل السليكا غير المعدلة، والطور المتحرك مذيب أقل قطبية مثل الهكسان.
Photo:
🧐
🔍
👀
المكشاف Detector
هو العين التي نبصر بها ما يحصل داخل الجهاز الكروماتوجرافي !
وهو الأداة التي نحصل من خلالها على نتائج الفصل الكروماتوجرافي،
وكذلك نشخص من خلاله مشكلات الفصل والجهاز الكروماتوجرافي.
لذلك تأتي أهميته ثانياً بعد العمود الكروماتوجرافي.
💡
💡
💡
مكشاف معامل الانكسار الضوئي
Refractive Index Detector, RID
من أقدم مكشافات HPLC وأكثرها شمولية، فهو يستجيب لجميع المواد الخارجة من العمود الكروماتوجرافي، بشرط اختلاف معامل انكسارها عن معامل انكسار الطور المتحرك المستخدم.
Photo Credit:
تعدد أنواع وتقنيات ومبادئ عمل مكشافات HPLC تعتبر من أكثر العوامل التي ساهمت في انتشار تقنية HPLC وتوسع تطبيقاتها !
حيث يمكن استخدام المكشافات البسيطة مثل مكشاف
معامل الإنكسار الضوئي refractive index detector - RID
وصولاً لأجهزة الطيف المتقدمة مثل مطياف الرنين النووي
💡
كيف يتم فصل المركبات عن بعضها في أعمدة C18 الخاصة بجهاز HPLC ؟
تنطبق هنا قاعدة " الشبيه ينجذب للشبيه " !
حيث أن:
عمود C18 يعتبر عمود غير قطبي بدرجة عالية !
فلذلك ستنجذب له المركبات غير القطبية (الكارهة للماء، الهيدروفوبية) بدرجة أكبر من المركبات القطبية.
في الصورة:
💉
الحاقن الآلي Autosampler
يمكن اعتباره أهم وسائل الرفاهية وزيادة الإنتاجية في أجهزة HPLC !
بدونه سيضطر الكيميائي للبقاء بجانب جهاز الـ HPLC من أجل حقن العينات يدوياً !
أجهزة الحاقن الآلي اليوم أصبحت أكثر من جهاز لحقن العينة! حيث تعدت ذلك لإجراء بعض معالجات تحضير العينات !
📹
هذا الفيديو
يوضح دورة حقن عينة في جهاز HPLC باستخدام الحاقن الآلي Autosampler.
بدايةً يغسل إبرة سحب العينة من الخارج، ثم تتحرك الإبرة للعينة المحددة وتنزل وتسحب الحجم المطلوب من العينة، ثم تعود الإبرة للغسيل من الخارج من بقايات العينة، وبعدها يحقن العينة.
#الكروماتوجرافيا
📣
للتذكير بالأجزاء الرئيسية في جهاز HPLC بعدما أطلنا الحديث كثيرًا عن الأعمدة الكروماتوجرافية والمفاهيم المرتبطة بها.
والعمود الكروماتوجرافي طبعاً هو قلب الجهاز الكروماتوجرافي وعمليات الفصل الكروماتوجرافي تحصل داخله؛ لذلك استحق الإطالة والتفصيل.
#الكروماتوجرافيا
📠
هنا أجزاء جهاز HPLC مع مكشاف الأشعة فوق البنفسجية والمرئية UV/Vis Detector.
لاحظوا أنه مكون من وحدات Modules منفصلة عن بعضها ومرتبطة فقط بالأنابيب والتوصيلات الكهربائية.
لكن هل فعلاً نحتاج كل هذه الوحدات في أي HPLC ؟؟؟
هل يمكن الاستغناء عن بعضها ؟؟ ماذا؟
#الكروماتوجرافيا
🫀
العمود الكروماتوجرافي Chromatography Column
هو قلب جهاز ال HPLC !!
ورغم أنه من أصغر الأجزاء في الجهاز؛ إلا أن جميع أجزاء الجهاز الأخرى لا فائدة منها إذا لم يكن العمود موجودًا؛
لأن الفصل الكروماتوجرافي يحصل في العمود.
#الكروماتوجرافيا
💡
مع أن الغالب في تصاميم أجهزة HPLC هو نظام الوحدات Modular والذي له مزاياه المتعددة،
إلا أن بعض أجهزة HPLC يتم تصميمها على شكل جهاز واحد متكامل (صندوق واحد) يحتوي جميع المكونات الضرورية والإضافات اللازمة للحصول على أفضل فصل كروماتوجرافي وأدق قياس.
Photo Credit:
@shimadzussi
⛽️
مضخة HPLC الرباعية Quaternary Pump
هي النوع الأكثر انتشاراً هذه الأيام !
وهي نفس المضخة الأحادية ذات الخط الواحد، ولكن يمكنها تكوين الطور المتحرك بخلط عدد من المذيبات يصل لأربعة، من خلال وحدة إضافية في المضخة تسمى الصمام التناسبي Proportioning Valve.
#الكروماتوجرافيا
📢
📢
للتذكير بالوحدات الرئيسية في أجهزة كروماتوجرافيا السائل عالية الأداء HPLC !
خاصة بعد التوسع في تفاصيل عدد من أهم المكشافات Detectors المختلفة لهذا الجهاز.
.
📠
هنا أجزاء جهاز HPLC مع مكشاف الأشعة فوق البنفسجية والمرئية UV/Vis Detector.
لاحظوا أنه مكون من وحدات Modules منفصلة عن بعضها ومرتبطة فقط بالأنابيب والتوصيلات الكهربائية.
لكن هل فعلاً نحتاج كل هذه الوحدات في أي HPLC ؟؟؟
هل يمكن الاستغناء عن بعضها ؟؟ ماذا؟
#الكروماتوجرافيا
🟢🔴
🟢🔴
🟢🔴
عندما نريد فصل مكونات عينة تختلف في خواصها كثيراً مثل أن تكون بعض المكونات متأينة وبعضها هيدروفوبية مثلاً، فهنا قد يفيدنا استخدام :
أعمدة HPLC مختلطة النوع
Mixed-Mode HPLC Columns
هذه الأعمدة لها القدرة على فصل المركبات الهيدروفوبية مثل أعمدة C18، إضافة
🔍
🔎
🔍
معرفتنا عن طبيعة العينة ومكوناتها من أهم ما يساعدنا في اختيار أو تطوير طريقة HPLC مناسبة لفصل العينة.
ومن أهم ما نحتاج أن نعرفه عن العينة:
- مدى ذوبانيتها في الماء أو المذيبات العضوية
- عدد المركبات فيها والمركبات المستهدفة بالفصل
- أشكال المركبات فيها
🌡️
♦️
رغم أن حرارة عمود HPLC لم تكن من العوامل التي نهتم كثيراً بتغييرها أثناء تطوير طرق الفصل؛ إلا أن أهميتها تزايدت في السنوات الأخيرة خاصة مع تزايد الاعتماد على الأعمدة ذات الحبيبات الصغيرة ( أصغر من 3 ميكرومتر).
فالآن صرنا نستخدمها كعامل مهم لتحسين الفصل أثناء تطوير الطرق
🔓
🔑
🔐
كروماتوجرافيا الألفة (الانجذاب)
Affinity Chromatography
من أفضل طرق الفصل الكروماتوجرافي في انتقائيتها العالية وقلة تعرضها للأخطاء الناتجة من تداخل المواد المستهدفة بالفصل مع الشوائب الموجودة في العينة؛
وذلك لاعتمادها على التجاذبات الحيوية الانتقائية للجزيئات الحيوية
🗞️
مقالة جيدة ومختصرة عن انقسام القمم Peak Splitting في HPLC
هذه المشكلة شائعة وتظهر لأغلب من يعمل على أجهزة HPLC !
ظهرت معي قبل أيام أثناء تطوير طريقة لمركب يحتوي مجموعات وظيفية حامضية وقاعدية😅
وكان السبب عدم مناسبة قيمة pH الخاصة بالطور المتحرك Mobile Phase لهذا المركب.
In
#HPLC
#chromatographic
peaks represent individual components eluting from the column over time. In some cases, the peak may exhibit splitting. Understanding peak splitting can be helpful in achieving accurate and reliable results in HPLC analysis
🔖
أهم البيانات التي نحتاجها لتمييز أي عمود لجهاز HPLC دائماً تكون موجودة على العمود كما في الصورة أدناه.
إضافة لبيانات العمود، نجد دائماً سهم للدلالة على اتجاه تدفق الطور المتحرك من الحاقن للمكشاف، ويساعد على توصيل العمود بأنابيب الجهاز في الاتجاه الصحيح.
#الكروماتوجرافيا
🔷
في مشروع الطالبين ماجد وزكريا لفصل الهيدركربونات بنزين-نفثالين-أنثراسين، وبعد التحقق من مناسبة مكشاف UV/Vis للكشف عن المركبات الثلاثة، يأتي دور اختيار عمود الفصل المناسب، والطور المتحرك وآلية الفصل المناسبة (Separation Mechanism).
وأهم ما يجب أن يوفره العمود هو استبقاء
❓
❓
سنبدأ - إن شاء الله - سلسلة من التطبيقات العملية على جهاز كروماتوجرافيا السائل عالية الأداء HPLC ، لتوضيح أهم مبادئ هذه التقنية.
ونبدأ هنا بمشروع للطالبين ماجد وزكريا نفذاه لتطوير طريقة لفصل ثلاثة مركبات هيدروكربونية هي: بنزين – نفثالين – أنثراسين (موضح تركيبها في
⛽️
مضخة HPLC ذات الخط الواحد Isocratic Pump
هي الحد الأدنى من المضخات الذي يجب توفره في أي جهاز HPLC.
هذه المضخة توفر الأداء اللازم لضخ الطور المتحرك عبر خط أنابيب وحيد،
لذلك يجب تحضير الطور المتحرك بكافة مكوناته، وبالنسب المطلوبة قبل وضعه في زجاجته.
#الكروماتوجرافيا
💡
حمام الموجات فوق الصوتية Ultrasonic Bath
من الطرق الشائعة في التخلص من الغازات الذائبة في مذيبات HPLC لتوفره في معظم المختبرات، ورخيص، وسهل الاستخدام.
ولكن!
كفاءته في التخلص من الغازات الذائبة منخفضة (20-25% عادة) وقد لا تكفي لتلافي مشكلة تكون الغازات داخل HPLC !!
⚖️
"الطريقة التحليلية المرجعية" Reference Method
هي طريقة ثبت تحقيقها لأهداف التحليل المنشودة، وثباتها، من خلال استخدامها بشكل واسع في مختبرات عديدة وعبر سنوات عديدة.
ولذلك تعتمدها المنظمات الدولية أو الجهات الحكومية كــ "مرجع" لغيرها من الطرق التحليلية.
من أشهر الطرق
👴
🧓
هل سبق أن شاهدت عمود HPLC يحتضر ويوشك أن يموت ؟!
الصور المرفقة توضح مثالاً عملياً لأحد أهم مؤشرات " شيخوخة " عمود HPLC وأن الوقت قد حان لتغييره بعمود جديد !
حيث خرجت قمم مركباتنا في وقت مبكر أقصر بكثير من المعتاد، رغم أننا لم نغير أياً من ظروف الفصل !
الكروماتوجرام في
🔷
عمود C18 في HPLC
هو العمود الأكثر استخداماً وتطبيقات هذه الأيام !
وهو أيقونة الفصل باستخدام الطور المعكوس
Reversed-Phase HPLC
والتي تمثل ما يصل إلى 75% من مجمل التحاليل على الـ HPLC !
Photo Credit:
🫧
🫧
🫧
الرش بالهيليوم Helium Sparging
الطريقة المرجعية والأعلى كفاءة في التخلص من الغازات الذائبة في مذيبات HPLC !
حيث يمكن باستخدامها التخلص من حوالي 80% من غازات الهواء الذائبة في مذيبات الـ HPLC.
تسمى أيضاً helium purging OR helium gas bubbling
#الكروماتوجرافيا
🔷
🔹
أثناء تطوير طريقة تحليلية على HPLC يجب ضبط معدل التدفق Flow Rate الأنسب لنوع المكشاف الذي لدينا، واختيار عمود بقطر داخلي مناسب لضمان تحسين حساسية المكشاف Sensitivity.
مكشاف مطياف الكتلة مثلاً يتطلب في معظم الأحيان معدل تدفق منخفض ( 0.1-0.3 mL/min ) مقارنة بمعظم مكشافات
🛡️
خط الدفاع الأول في أجهزة HPLC ضد دخول الجسيمات الصلبة للجهاز هو:
فلتر مدخل المذيب Solvent Inlet Filter
وهو فلتر بنفاذية 10 ميكرومتر أو أقل
يصنع من المعدن أو الزجاج بالكامل، وقد يستخدم البلاستيك لصنع الجسم الخارجي للفلتر.
في الصورة: نوعين من هذه الفلاتر
#الكروماتوجرافيا
💡
من التقنيات الكروماتوجرافية للفصل التحضيري:
كروماتوجرافيا السائل منخفضة الضغط
Low Pressure Liquid Chromatography - LPLC
و
كروماتوجرافيا السائل متوسطة الضغط
Medium Pressure Liquid Chromatography - MPLC
وتستخدمان بشكل واسع في تنقية البروتينات.
Photo Credit:
@BioRadLifeSci
📰
وثيقة "إجراءات التشغيل القياسية"
Standard Operating Procedures (SOP)
نجد فيها عادة طريقة تشغيل مفصلة لجهاز HPLC مع تعليمات تحضير العينات وتحليلها خطوة بخطوة، لتسهيل إجراءات التحليل على المحللين، ولضمان الحصول على النتيجة الصحيحة من التحليل في كل مرة.
توفرها عادة الشركات
☕️
في مشروع لتحليل السكريات في حبوب القهوة العربية من أشجار البن في جنوب المملكة، شهدت أكبر عدد من أعمدة HPLC التي تعرضت للشيخوخة ثم التقاعد !
الأعمدة المستخدمة في معظم تحاليل السكريات هي أعمدة أمينو (NH2 Columns)، ورغم مزاياها لفصل السكريات إلا أنها من أقصر أعمدة HPLC عمراً !
🏗️
عندما نعجز عن إيجاد طريقة تحليلية مناسبة لفصل وتحليل عيناتنا أو مركباتنا؛ ولم نجد ما يناسب في المنشورات العلمية ولا في منشورات الشركات ولا في الطرق المرجعية أو الـSOP ؛
أو عندما لا تتوفر لدينا الإمكانات اللازمة للطريقة المناسبة ولا نستطيع توفيرها؛
فحينها لا مفر من تطوير
💽
💾
📀
برامج الأجهزة الكروماتوجرافية مثل جهاز HPLC و GC تطورت كثيراً خلال السنوات القليلة الماضية وسهلت علينا إنجاز المهام بكفاءة عالية وخلال وقت قصير وبجهود أقل نظراً لاستخدام التحكم الآلي بأجزاء ومهام الجهاز.
وتوفر الكثير من البرامج الحديثة حتى التحكم عن بعد بالجهاز
🚰
💧
💧
الماء .. هو سر الحياة !
حتى في المختبرات الكيميائية !
ولكن هل نحن فعلاً نستخدم النوع المناسب من المياه النقية في تجاربنا في المختبر ؟!
ليس دائماً ! وقد لا ندرك ذلك أحياناً !
قد نستخدم أحياناً نوعاً بمواصفات أقل مما نحتاج! وأحياناً أعلى مما نحتاج !
سنتكلم عن هذا هنا
⚡️
مكشاف التألق (فلوريسينس)
Fluorescence Detector, FLD
أحد أكثر مكشافات HPLC انتقائية وحساسية !
فقد يتفوق في حساسيته على مكشافات UV/Vis بـ 100 ضعف أو أكثر !
ولكن يجب أن تكون المادة قابلة للتألق (fluorescing) حتى تقاس بهذا المكشاف.
Photo Credit:
🔷
🔹
عند تطوير طريقة فصل على HPLC لعينة تحتوي مركبات حامضية أو قاعدية فيجب اختيار قيمة الأس الهيدروجيني (pH) للطور المتحرك على أساس علمي، وضبطها بدقة.
أما المركبات المتعادلة (كالهيدروكربونات، مثلا) فلا يتأثر فصلها بقيمة pH.
لذلك عندما تكون في عيناتنا مركبات حامضية أو قاعدية
🌡️
🌡️
🌡️
هل فرن العمود في HPLC جزءُ رئيسي يجب توفره مع جميع أجهزة HPLC ؟
أم يمكن استخدام HPLC حتى بدون توفر فرن للعمود ؟؟
الجواب المختصر:
الفرن ليس إجباري - لكن بشرط أن نستطيع تثبيت درجة حرارة عمود HPLC بطريقة أخرى !
سنحاول في هذه السلسلة توضيح ذلك باختصار.
.
عندما نسمع مصطلح
كروماتوجرافيا العمود Column Chromatography
يتبادر للذهن مباشرة
كروماتوجرافيا العمود التقليدي
Traditional Column Chromatography
وهذا طبيعي لأنه الصورة الأقدم لكروماتوجرافيا العمود.
ويستخدم بشكل واسع في تنقية المركبات من مخاليطها.
#الكروماتوجرافيا
💦
⛽️
معدل التدفق Flow Rate
من العوامل الرئيسية التي يجب دائماً ضبطها في طرق HPLC.
يساعدنا اختيار معدل التدفق المناسب في:
- الحصول على فصل أفضل لقمم مركباتنا
- أشكال أفضل للقمم الكروماتوجرافية
- حساسية أفضل في قياس القمم في المكشاف
- اختصار زمن التحليل للعينة الواحدة،
📏
أعمدة HPLC التحليلية تصنع بأبعاد مختلفة ولكن الأبعاد الشائعة هي:
طول العمود (Length): من 5 إلى 30 سم
القطر الداخلي (I.D.=Internal Diameter) : من 2 إلى 5 مليمتر.
حجم حبيبات الحشوة Particle Size of Packing:
3 أو 5 ميكرومتر
ودائماً نجدها مدونة على كل عمود وعلى صندوق العمود.
💡
توجد أعمدة لـ HPLC لها أقطار أقل من 1 مليمتر،
وتسمى أعمدة ميكرو أو نانو Micor/Nano لأن تدفق الطور المتحرك من خلالها يكون بمعدل صغير جداً بوحدات ميكرولتر في الدقيقة μL/min أو أقل.
مزاياها: توفير مذيبات الطور المتحرك، وحساسية Sensitivity أفصل.
Photo:
💻
للمهتمين والمتخصصين في علم السموم !
سلسلة من الويبنارات من الشركة الرائدة Waters
في الرابط عدد من المحاضرات يمكن التسجيل فيها؛ بعضها مسجل وبعضها سيكون مباشر خلال الأيام القادمة.
بالتوفيق.
🔷
توجد عدة أنواع من مكشافات UV/Vis لأجهزة HPLC
ومن المهم معرفة النوع الذي لدينا ومواصفاته ومحدودياته حتى نستفيد من قدراته استفادة كاملة، أو حتى لا نتوقع منه أكثر مما يستطيع !
وأهم الأنواع:
1- مكشاف ثابت الطول الموجي Fixed-Wavelength Detector
2- مكشاف متغير الطول الموجي
💧
الطور المتحرك Mobile Phase
في كثير من تطبيقات HPLC يكون عبارة عن مخلوط من مذيبين أو أكثر.
ويمكن تكوين هذا المخلوط من خلال:
1- الخلط اليدوي
2- الخلط عند ضغط عال باستخدام المضخة الثنائية Binary
3- الخلط عند ضغط منخفض باستخدام الصمام التناسبي في المضخات الرباعية Quaternary.
📚
المصدر الأكثر ثراءً بالطرق التحليلية الخاصة بالأجهزة الكروماتوجرافية مثل HPLC هو بالطبع
المنشورات العلمية في المجلات المحكمة
فهي تحتوي آلاف الطرق التحليلية المتنوعة والمصممة لتحليل العديد من المركبات في شتى المجالات.
ولكن الحصول على الطريقة الأنسب لعينتنا ومركباتنا قد
🎯
المكشاف المثالي لجهاز HPLC
The ideal detector
له الخواص التالية:
- يكشف عن المواد التي نستهدفها دون التأثر بما حولها من مكونات للعينة أو للطور المتحرك (انتقائية ممتازة selectivity)
- يقيس تراكيز منخفضة جداً من المواد المستهدفة بالتحليل (حساسية ممتازة
📏
كيف تؤثر أبعاد عمود HPLC في توجيه خياراتنا عند اختيار معدل تدفق الطور المتحرك في HPLC ؟
أولاً يجب أن نتذكر أن مقدار الضغط في جهاز HPLC عامل رئيسي يتحكم بمعدل التدفق الذي يمكننا استخدامه.
ويتولد هذا الضغط بشكل رئيسي نتيجةً للمقاومة التي يواجهها الطور المتحرك خلال مرروه في
🔎
🔍
عند البحث عن طريقة تحليلية لتحليل مواد على جهاز HPLC أو الرغبة في تطوير طريقة جديدة،،
فإن أهم ما نبدأ البحث عنه هو نوع المكشاف Detector اللازم للكشف عن المركبات المستهدفة بالتحليل وقياسها. لأنه إذا لم يتوفر لدينا المكشاف المناسب فقد يتعذر علينا تحقيق الهدف من استخدام
🧐
🔍
👀
المكشاف Detector
هو العين التي نبصر بها ما يحصل داخل الجهاز الكروماتوجرافي !
وهو الأداة التي نحصل من خلالها على نتائج الفصل الكروماتوجرافي،
وكذلك نشخص من خلاله مشكلات الفصل والجهاز الكروماتوجرافي.
لذلك تأتي أهميته ثانياً بعد العمود الكروماتوجرافي.
⚗️
توفر أعمدة الفينيل Phenyl في HPLC انتقائية selectivity خاصة للمركبات الأروماتية.
لذلك نستطيع بواسطتها فصل مركبات أروماتية قد تعجز عن فصلها أعمدة C18 المعتادة.
ويوجد منها عدد من الأنواع حسب المركب المرتبط بسطح حبيبات السليكا.
Photo Credit:
هذا الويبنار لا يفوتكم!
نسبة كبيرة من مشكلات التحليل على الأجهزة الكروماتوجرافية تنشأ من الأخطاء في تحضير العينات للتحليل.
والتحليل الكروماتوجرافي ليس فقط معرفة تشغيل الجهاز؛ بل من المهم جدًا الإلمام بطرق تحضير العينات قبل وضعها في الجهاز الكروماتوجرافي.
بالتوفيق.
An upcoming webinar from
@SartoriusGlobal
will provide details of sample preparation techniques and guide you towards the correct method for your sample, whether it is a simple LLE, or a more complex solid phase extraction.
Register here:
🔷
تذيُّل القمة Peak Tailing هو أكثر أشكال تشوّه القمم الكروماتوجرافية ظهوراً في نتائج HPLC.
قليل من التذيل لا يؤثر عادة على نتائجنا. ولكن عندما تتذيل القمم بشكل كبير سيؤثر ذلك على جودة الفصل!
حيث يتسبب في صعوبة قياس مساحة القمة Peak Area ويؤثر على ارتفاعها Peak Height مما
🔚♾
🔚♾
🔚♾
كم هو العمر الافتراضي لعمود HPLC ؟
سؤال يتكرر كثيراً !
والإجابة المختصرة هي:
أنت من يحدد عمر عمود HPLC من خلال استخدامك له !
في مسيرتي مع HPLC لأكثر من 20 سنة الآن، لم أرمِ أو أتخلص من أي عمود HPLC 😅!
وسأتحدث هنا عن العمر الافتراضي لأعمدة HPLC.
.
هنا ملخص ممتاز لاستخدام كروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة TLC في فصل المركبات العضوية.
وفيه توضيح للمذيبات المناسبة لعدد من مجموعات المركبات العضوية.
وفي نهايته ملخص لأهم طرق الكشف عن الحزم المفصولة بعد انتهاء عملية الفصل #الكروماتوجرافي.
#الكروماتوجرافيا
It's out! The complete online guide for Thin Layer Chromatography! Learn how to TLC like a pro. Check out our tutorial article here:
#RealTimeChem
#chemtwitter
❓
❔
⁉️
ماذا أحتاج وكم أحتاج من وقت لأتعلم العمل على جهاز HPLC ؟
سؤال دائماً يتكرر عند كل من يتعرف على هذه التقنية الهامة والممتعة !
والإجابة الذهبية هي: " يعتمد "
IT DEPENDS !
يعتمد الوقت والجهد والمتطلبات اللازمة على عدد من العوامل لدى كل متعلم !
هناك مثلاً من يحتاج
💧
الآلية التي تعمل بها معظم أعمدة HPLC الشائعة،
والتي لابد أن يكون كل من استخدم الـ HPLC قد اسيتخدم إحدى صورها،،
هي:
كروماتوجرافيا التجزئة Partition HPLC
وفيها يغطى سطح جسيمات السليكا الصلبة بطبقة رقيقة من سائل يعمل هو كطور ثابت.
Photo Credit:
💡
مكشاف تشتت الضوء التبخيري
Evaporative Light-Scattering Detector, ELSD
من المكشافات الحديثة نسبياً لأجهزة HPLC
ويتميز بأنه مكشاف شمولي universal واسع النطاق، ويكشف عن معظم المواد الخارجة من العمود الكروماتوجرافي، وبحساسية ممتازة !
Photo Credit:
بودكاست يناقش موضوع درجة نقاوة الكيماويات المطلوبة لتحضير المواد المرجعية المعتمدة (CRMs).
جذبني لأني ألاحظ كثيراً من الكيميائيين "يسرفون" في درجة النقاوة المطلوبة للكيماويات رغم أن استخدامهم لها قد لا يحتاج لهذه النقاوة!
فمثلاً لا نحتاج عادة لمادة بنقاوة 99.99٪ من أجل
Prioritizing Purity: How Pure is Pure Enough?
The importance of defining purity when high-purity inorganic raw materials are essential for analytical success.
Listen to the podcast here:
(Sponsored Post from Zeptometrix)
🏗️
تطوير طريقة تحليلية جديدة لفصل مكونات عينة ما يتطلب منا عدداً من الاعتبارات والمعلومات التي يجب أن نلم بها قبل البدء في عملية التطوير،
ومن أهمها:
- معرفة كافية عن طبيعة العينة ومكوناتها المختلفة
- طبيعة وخواص المواد المستهدفة بالتحليل (مثلا: أيونية، قطبية، غير قطبية،
🟥🟧🟨🟩🟦🟪
مكشاف مصفوفة الصمامات الثنائية
Diode-Array Detector, DAD
ويسمى أيضاً Photodiode-array, PDA
أفضل نوع من مكشافات UV-Vis الخاصة بأجهزة HPLC من حيث ثراء البيانات التي يوفرها لكل فصل كروماتوجرافي.
#الكروماتوجرافيا
Photos:
بحمد الله وتوفيقه تم تقديم محاضرة
" التقنيات الكروماتوجرافية: لماذا ؟ "
مساء يوم أمس الاثنين 4 مارس 2024م
وقد حضرها ما يزيد عن 750 من المهتمين بالتقنيات الكروماتوجرافية من 15 دولة حول العالم !
شكراً لجميع الحضور هذا الاهتمام وإثراء المحاضرة
وشكراً لكل من سجل ولم يتيسر له